StARD4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403624-ACT

STARD4 umano codifica StARD4, una proteina di trasferimento lipidico con dominio START che lega il colesterolo e supporta il traffico non vescicolare degli steroli tra membrane intracellulari. StARD4 contribuisce all’omeostasi del colesterolo influenzando la distribuzione degli steroli che alimenta i meccanismi di rilevamento e di controllo biosintetico a livello del reticolo endoplasmatico (ER), inclusi nodi regolatori nelle vie metaboliche lipidiche dipendenti da SREBP. Modellando i pool cellulari di colesterolo, StARD4 può influenzare la composizione delle membrane, la dinamica delle goccioline lipidiche e processi di segnalazione legati all’adattamento metabolico. Una gestione deregolata del colesterolo è rilevante per fenotipi cardiometabolici e risposte allo stress associate ai lipidi, rendendo STARD4 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla biologia degli steroli e su vie correlate associate a malattia.

StARD4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STARD4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

StARD4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STARD4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STARD4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di StARD4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STARD4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da StARD4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via StARD4 nelle cellule tumorali con espressione di STARD4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.