Plasmide CRISPR d'Activation (h) StARD4: sc-403624-ACT

Le gène humain **STARD4** code **StARD4**, une protéine de transfert lipidique à domaine START qui se lie au cholestérol et favorise le trafic non vésiculaire des stérols entre les membranes intracellulaires. StARD4 contribue à l’homéostasie du cholestérol en influençant la distribution des stérols, laquelle alimente les mécanismes de détection et de contrôle biosynthétique au niveau du réticulum endoplasmique (RE), notamment des nœuds de régulation des voies du métabolisme lipidique dépendantes de **SREBP**. En modulant les pools cellulaires de cholestérol, StARD4 peut affecter la composition membranaire, la dynamique des gouttelettes lipidiques et des processus de signalisation liés à l’adaptation métabolique. Une gestion dérégulée du cholestérol est pertinente pour des phénotypes cardiométaboliques et des réponses au stress associé aux lipides, ce qui fait de **STARD4** une cible utile pour des études mécanistiques de la biologie des stérols et des voies associées à des maladies.

StARD4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STARD4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

StARD4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STARD4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STARD4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de StARD4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STARD4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de StARD4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie StARD4 dans les cellules tumorales présentant une expression de STARD4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.