STAMBPL1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405119-ACT

STAMBPL1 (STAM binding protein-like 1) codifica una deubiquitinasi metalloproteasica allo zinco della famiglia JAMM che partecipa allo smistamento endosomiale e alla regolazione, dipendente dall’ubiquitina, del turnover delle proteine di membrana. Modulando eventi di deubiquitinazione legati al traffico associato a ESCRT, STAMBPL1 influenza l’internalizzazione dei recettori, l’attenuazione del segnale e la proteostasi lungo le vie endolisosomiali. La sua attività collega la segnalazione dell’ubiquitina a risposte cellulari quali l’instradamento dei recettori per i fattori di crescita, la dinamica della segnalazione infiammatoria e il rimodellamento adattativo allo stress del sistema endomembranoso. Alterazioni nella “modifica” dell’ubiquitina e nel traffico endosomiale sono ampiamente implicate in oncologia, neurodegenerazione e disfunzioni immunitarie, rendendo STAMBPL1 un nodo rilevante per studi meccanicistici di questi processi.

STAMBPL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STAMBPL1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

STAMBPL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STAMBPL1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STAMBPL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di STAMBPL1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STAMBPL1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da STAMBPL1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via STAMBPL1 nelle cellule tumorali con espressione di STAMBPL1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.