Plásmido CRISPR de Activación (h) SSX1: sc-403551-ACT

SSX1 (sarcoma sinovial, punto de rotura X 1) codifica una proteína nuclear similar a un antígeno cáncer‑testículo, implicada en la regulación de la transcripción y en procesos asociados a la cromatina, con interacciones descritas que la vinculan con la represión relacionada con Polycomb y el control epigenético de la expresión génica. La actividad de SSX1 se asocia con la modulación de programas del desarrollo, la identidad celular y los estados de diferenciación mediante efectos sobre redes transcripcionales. La expresión aberrante de la familia SSX es especialmente notable en el sarcoma sinovial a través de los oncogenes de fusión SS18–SSX, que reconfiguran la remodelación de la cromatina y los programas transcripcionales. Como resultado, SSX1 se estudia ampliamente en biología tumoral, epigenética y en contextos de expresión de antígenos relevantes para la inmuno‑oncología, como marcador de desregulación del control génico.

SSX1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SSX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SSX1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SSX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SSX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SSX1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SSX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SSX1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SSX1 en células tumorales con expresión de SSX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.