Plasmide CRISPR/Cas9 KO SSSCA1 (h): sc-406804

Présentation

SSSCA1 (autoantigène 1 du syndrome de Sjögren/de la sclérodermie) code une protéine nucléaire conservée, initialement identifiée comme autoantigène dans les maladies auto-immunes systémiques. Bien que ses fonctions moléculaires soient encore en cours d’élucidation, les données disponibles associent SSSCA1 à l’homéostasie nucléaire, aux interactions protéine–protéine et à des processus cellulaires répondant au stress, qui influencent la régulation génique et le contrôle du cycle cellulaire. Une expression altérée de SSSCA1 ou sa reconnaissance par le système immunitaire a été rapportée dans des contextes pertinents pour l’auto-immunité et la biologie du cancer, ce qui en fait une cible utile pour disséquer les mécanismes d’une régulation nucléaire aberrante. L’étude de SSSCA1 facilite des investigations au niveau des voies de signalisation sur la manière dont des protéines nucléaires contribuent à des pathologies associées à l’immunité et à des programmes de croissance dérégulés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SSSCA1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SSSCA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SSSCA1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SSSCA1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SSSCA1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SSSCA1 pour l'étude de la signalisation de SSSCA1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SSSCA1 essentiels à la fonction de SSSCA1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SSSCA1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SSSCA1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SSSCA1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SSSCA1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SSSCA1 plasmide HDR (h) et le SSSCA1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SSSCA1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SSSCA1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.