SREBP-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400575-ACT

SREBF2 kodiert das sterolregulatorische Element-bindende Protein 2 (SREBP‑2), einen membrangebundenen Transkriptionsfaktor, der bei niedrigen Sterolspiegeln durch Proteolyse aktiviert wird und anschließend die Expression von Genen induziert, die die Cholesterinbiosynthese und -aufnahme steuern. Im Zusammenspiel mit SCAP- und INSIG-Proteinen reguliert SREBP‑2 den Mevalonatweg sowie den LDL‑Rezeptor‑vermittelten Cholesterinimport und koordiniert so die Lipidhomöostase mit ER‑Stress und metabolischen Signalen. Eine veränderte SREBF2/SREBP‑2‑Aktivität wurde mit Dyslipidämie und Phänotypen des metabolischen Syndroms in Verbindung gebracht und zudem mit einer lipidmetabolischen Umprogrammierung („lipid rewiring“), die in Krankheitskontexten Proliferation und inflammatorische Signalwege unterstützt. Als zentraler Knotenpunkt der Sterolerfassung und transkriptionellen Kontrolle wird SREBF2 breit hinsichtlich seiner Rolle in der Stoffwechselregulation, Membranzusammensetzung sowie der Wechselwirkungen mit Autophagie- und angeborenen Immunwegen untersucht.

SREBP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SREBF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SREBP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SREBF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SREBF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SREBP-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SREBF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SREBP-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SREBP-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SREBF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.