SRA Plasmide Double Nickase (h): sc-404308-NIC

SRA1 codifica lo Steroid Receptor RNA Activator 1 (SRA), un co-regolatore multifunzionale sotto forma di RNA e proteina che modula i programmi trascrizionali controllati dai recettori nucleari e da altri fattori di trascrizione. SRA partecipa al rimodellamento della cromatina e all’assemblaggio di complessi trascrizionali che influenzano l’espressione genica responsiva agli ormoni, collegando la segnalazione steroidea a processi regolatori epigenetici e mediati dall’RNA più ampi. Attraverso queste attività, SRA1 è associato a vie che governano la differenziazione cellulare, la regolazione del metabolismo e gli output trascrizionali in risposta allo stress. Un’espressione deregolata di SRA1/SRA è stata riportata in diversi contesti patologici legati agli ormoni e a malattie proliferative, a supporto del suo impiego come bersaglio meccanicistico per analizzare le perturbazioni delle reti trascrizionali.

SRA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SRA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SRA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SRA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SRA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.