Sprr1b Double Nickase Plasmid (m): sc-423137-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Sprr1b Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Sprr1b Double-Nickase-Plasmid (m) und Sprr1b Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sprr1b abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Sprr1b Double Nickase Plasmid (m) | sc-423137-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Sprr1b Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423137-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sprr1b (small proline-rich protein 1B) ist ein Vorläuferprotein der verhornten Hülle (cornified envelope) der Maus, das während der terminalen Keratinozytendifferenzierung durch Transglutaminasen quervernetzt wird und so zur Ausbildung der epidermalen Barriere und zur mechanischen Widerstandsfähigkeit beiträgt. Seine Expression wird nachgeschaltet an Signale von epithelialem Stress und Differenzierung induziert, und es wird häufig als Marker für Programme der squamösen Differenzierung verwendet, die EGFR/MAPK- und AP-1‑regulierte transkriptionelle Antworten umfassen. Über die Haut hinaus kann Sprr1b in verletzten Epithelien und in regenerierenden Geweben hochreguliert werden, was auf Rollen bei der Barriere-Reparatur und der zellulären Anpassung an Schäden hinweist. Eine fehlregulierte Expression der SPRR‑Familie wurde mit hyperkeratotischen und entzündlichen Hautzuständen sowie mit Kontexten epithelialen Remodelings in Verbindung gebracht, wodurch Sprr1b für Studien zu Barrierefunktionsstörungen und zur Biologie epithelialen Stresses relevant ist.
Sprr1b Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sprr1b-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sprr1b abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sprr1b-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sprr1b-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.