Plasmide CRISPR/Cas9 KO SPLUNC2 (h): sc-406336

Présentation

BPIFA2 code SPLUNC2, un membre sécrété de la famille des protéines à repliement de type BPI, exprimé dans les épithéliums des voies aériennes supérieures et des glandes salivaires. SPLUNC2 contribue à la défense innée des muqueuses en interagissant avec des composants microbiens et en influençant l’homéostasie du liquide de surface des voies aériennes, reliant ainsi la fonction de barrière épithéliale aux programmes de signalisation inflammatoire. En raison de ses rôles dans les interactions hôte–microbe et la modulation des réponses immunitaires locales, BPIFA2 est fréquemment étudié dans les travaux sur l’inflammation des voies respiratoires, la susceptibilité aux infections et le remodelage épithélial. Des altérations de l’expression de BPIFA2/SPLUNC2 ont été associées à des phénotypes de maladies des voies aériennes et servent de marqueur moléculaire dans des modèles de conditions inflammatoires sino-nasales et pulmonaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SPLUNC2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BPIFA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BPIFA2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BPIFA2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SPLUNC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BPIFA2 pour l'étude de la signalisation de SPLUNC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BPIFA2 essentiels à la fonction de SPLUNC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BPIFA2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SPLUNC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SPLUNC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BPIFA2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SPLUNC2 plasmide HDR (h) et le SPLUNC2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BPIFA2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BPIFA2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.