SphK2 Double Nickase Plasmid (h): sc-417921-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SphK2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SphK2 Double-Nickase-Plasmid (h) und SphK2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SPHK2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SphK2: sc-517192
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SphK2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417921-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SphK2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417921-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPHK2 kodiert die Sphingosinkinase 2 (SphK2), ein Enzym, das Sphingosin phosphoryliert und dadurch Sphingosin-1-phosphat (S1P) erzeugt – einen bioaktiven Lipidmediator, der Stoffwechsel- und Signalnetzwerke miteinander verknüpft. Über die S1P-Produktion und die subzelluläre Kompartimentierung beeinflusst SphK2 MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und NF-κB-assoziierte Prozesse, die Proliferation, Überleben, Stressantworten und entzündliche Signalgebung prägen. Die Aktivität von SphK2 ist zudem mit mitochondrialen und nukleären Funktionen gekoppelt und trägt zur Regulation der Apoptose, zur epigenetischen Kontrolle und zur zellulären Bioenergetik bei. Eine Fehlregulation des S1P-Stoffwechsels und der mit SPHK2 verbundenen Signalwege wurde u. a. in Zusammenhängen wie der Krebsbiologie, Immunfehlregulation sowie kardiometabolischen und neuroinflammatorischen Krankheitsmechanismen beschrieben.
SphK2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SPHK2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SPHK2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SPHK2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SPHK2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.