Plásmido CRISPR de Activación (h) SphK2: sc-417921-ACT

El gen humano **SPHK2** codifica la esfingosina quinasa 2 (SphK2), una quinasa lipídica que fosforila la esfingosina para generar esfingosina-1-fosfato (S1P), un mediador de señalización pleiotrópico que modula la supervivencia celular, las respuestas al estrés, la migración y la señalización inflamatoria. La actividad de SphK2 influye en el equilibrio del “reóstato” de esfingolípidos entre ceramidas/esfingosina proapoptóticas y S1P prosupervivencia, lo que la vincula con la función mitocondrial, la señalización nuclear y procesos asociados a la cromatina. Mediante la regulación de los reservorios intracelulares de S1P y de vías posteriores, incluidos los programas relacionados con MAPK/ERK, PI3K-AKT y NF-κB, **SPHK2** contribuye al control dependiente del contexto de la proliferación y la modulación inmunitaria. La desregulación del metabolismo de esfingolípidos que involucra a **SPHK2** se ha asociado con la biología del cáncer, mecanismos relacionados con neuroinflamación y neurodegeneración, y vías de estrés cardiometabólico, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de señalización y homeostasis lipídica.

SphK2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SPHK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SphK2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SPHK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SPHK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SphK2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SPHK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SphK2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SphK2 en células tumorales con expresión de SPHK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.