Plasmide Double Nickase (h) SphK1: sc-401274-NIC

SPHK1 code la sphingosine kinase 1 (SphK1), une kinase des lipides qui phosphoryle la sphingosine pour produire la sphingosine-1-phosphate (S1P), un sphingolipide bioactif qui influence la survie, la prolifération et la migration cellulaires, ainsi que la signalisation inflammatoire. En déplaçant l’équilibre entre la céramide/la sphingosine pro-apoptotiques et la S1P pro-survie, SphK1 participe au « rhéostat » des sphingolipides et intègre des signaux issus des voies des facteurs de croissance et des cytokines. La S1P produite par SphK1 peut agir intracellulairement et via les récepteurs de la S1P pour moduler des programmes en aval, notamment MAPK/ERK, PI3K/AKT, NF-κB et les réponses angiogéniques. Une signalisation SPHK1/S1P dérégulée a été associée à des phénotypes oncogéniques, à la fibrose et à l’inflammation à médiation immunitaire, ce qui en fait un nœud largement étudié dans des réseaux de signalisation pertinents pour les maladies.

SphK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SPHK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SPHK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SPHK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SPHK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.