Plásmido CRISPR de Activación (h) Sp8: sc-401546-ACT

SP8 codifica un factor de transcripción Sp8 con dedos de zinc que se une a elementos reguladores ricos en GC para controlar programas de expresión génica durante el desarrollo embrionario humano. Está implicado en procesos de patrón y diferenciación, incluido el desarrollo del neuroectodermo y craneofacial, al coordinar redes transcripcionales que interactúan con la señalización impulsada por morfógenos, como WNT/β-catenina y otras vías del desarrollo relacionadas. La actividad alterada de SP8 o la desregulación de redes de genes diana se ha asociado con fenotipos de malformaciones congénitas y con una regulación anómala de genes del desarrollo, lo que lo hace relevante para estudios de especificación de linaje y morfogénesis. Como regulador nuclear de unión al ADN, Sp8 se utiliza con frecuencia como un nodo para cartografiar circuitos transcripcionales y el control potenciador-promotor en sistemas en diferenciación.

Sp8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SP8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sp8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SP8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SP8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sp8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SP8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sp8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sp8 en células tumorales con expresión de SP8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.