SP140 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409816-ACT

SP140 kodiert ein nukleär punktförmig lokalisiertes Protein mit PHD- und Bromodomänen, das als Chromatin-Reader und Transkriptionsregulator fungiert und in Immunzell-Linien verstärkt exprimiert wird. Es ist an der epigenetischen Steuerung von Genprogrammen beteiligt, die mit angeborenen und adaptiven Immunantworten verknüpft sind, und beeinflusst Signalwege wie die Interferon-Signalgebung sowie entzündliche Transkriptionsnetzwerke. Durch Interaktionen mit modifizierten Histonen und chromatinassoziierten Komplexen trägt SP140 dazu bei, linienspezifische Genexpression und zelluläre Aktivierungszustände zu formen. Genetische und Expressionsstudien bringen eine Fehlregulation von SP140 mit einer erhöhten Anfälligkeit für immunvermittelte und entzündliche Erkrankungen in Zusammenhang, was seine Relevanz für mechanistische Forschung in der Immunologie und Chromatinbiologie unterstreicht.

SP140 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SP140-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SP140 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SP140-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SP140-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SP140-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SP140-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SP140-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SP140-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SP140-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.