Plásmido CRISPR de Activación (m) SP-lyase: sc-422908-ACT

El gen murino **Sgpl1** codifica la liasa de esfingosina-1-fosfato (S1P), una enzima asociada al retículo endoplásmico que degrada de forma irreversible la S1P para finalizar la señalización dentro de la red metabólica de los esfingolípidos. Al controlar los niveles intra y extracelulares de S1P, la liasa de S1P influye en la reostasis lipídica y en vías posteriores que regulan la supervivencia celular, las respuestas al estrés, la migración y el tráfico de células inmunitarias. La alteración de la actividad de **SGPL1** perturba el eje ceramida–esfingosina–S1P y se ha relacionado con fenotipos inflamatorios, desregulación metabólica y patobiología neuro-renal en sistemas modelo. Por ello, este gen se utiliza ampliamente para estudiar el flujo de esfingolípidos, la señalización de barrera/vascular y los mecanismos de homeostasis inmunitaria.

SP-lyase El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sgpl1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SP-lyase El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sgpl1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sgpl1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SP-lyase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sgpl1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SP-lyase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SP-lyase en células tumorales con expresión de Sgpl1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.