Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
SP-D Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422903
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SP-D El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SP-D, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SP-D Anticuerpo (1A10A9): sc-53138
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SP-D Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422903 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Sftpd codifica la proteína D del surfactante (SP-D), una colectina secretada producida principalmente por células alveolares tipo II y células de Clara, que contribuye a la homeostasis del surfactante pulmonar y a la defensa inmunitaria innata en superficies mucosas. SP-D reconoce patrones de carbohidratos en microbios y células apoptóticas, promoviendo la opsonización, la aglutinación y la modulación de la actividad de macrófagos y neutrófilos mediante interacciones dependientes de lectina. A nivel funcional, SP-D se integra en vías que controlan la proteostasis alveolar, la señalización de citocinas inflamatorias y las respuestas al estrés oxidativo que determinan la integridad de la barrera de las vías respiratorias. La alteración de la actividad de Sftpd/SP-D se asocia con una inflamación y remodelación pulmonar desreguladas, por lo que es relevante para estudiar mecanismos de lesión pulmonar aguda, fenotipos tipo asma y EPOC, y la susceptibilidad a infecciones respiratorias en modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SP-D (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sftpd en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sftpd junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sftpd tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SP-D.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sftpd para la investigación de la señalización de SP-D, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Sftpd críticos para la función de SP-D
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sftpd para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SP-D CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SP-D CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sftpd. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SP-D (m) y el plásmido HDR SP-D (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sftpd para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sftpd definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.