Sox9 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423093-ACT

Maus Sox9 kodiert einen Transkriptionsfaktor mit High-Mobility-Group-(HMG)-Box, der als zentraler Regulator der Linienfestlegung und der Gewebemorphogenese fungiert. Er integriert entwicklungsbiologische Signaleingänge, darunter die TGF‑β/BMP-, Wnt/β‑Catenin- und Hedgehog-Signalwege, um Programme zu steuern, die an der Chondrogenese, der Produktion extrazellulärer Matrix und der epithelialen Differenzierung beteiligt sind. Die Sox9-Aktivität beeinflusst Zellschicksalsentscheidungen und die Aufrechterhaltung von Vorläuferzellen durch die transkriptionelle Kontrolle von Genen wie Col2a1 und Acan, mit kontextabhängigem Crosstalk zu Faktoren der Runx-Familie. Eine fehlregulierte Sox9-Expression oder -Funktion wird mit angeborenen Skelettdefekten, fibroseassoziiertem Remodelling und krebsassoziierter Linienplastizität in Verbindung gebracht und macht Sox9 zu einem geeigneten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Entwicklung und zur krankheitsbedingten transkriptionellen Reprogrammierung.

Sox9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Sox9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sox9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Sox9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Sox9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sox9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Sox9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sox9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sox9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Sox9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.