Plásmido CRISPR de Activación (h) Sox-18: sc-402913-ACT

SOX18 codifica Sox-18, un factor de transcripción con dominio HMG-box que se une al ADN y coopera con otros miembros de la familia SOX para regular programas génicos que controlan el desarrollo vascular y linfático, la especificación endotelial y la morfogénesis tisular. Sox-18 influye en redes transcripcionales vinculadas a la integridad de las uniones endoteliales, la gemación (sprouting) de vasos y su remodelación, intersectando con ejes de señalización como las respuestas angiogénicas impulsadas por VEGF y los circuitos transcripcionales del desarrollo. La actividad alterada de SOX18 se ha asociado con un patrón vascular/linfático desregulado y con la angiogénesis asociada a tumores, lo que la hace relevante para estudiar la plasticidad de las células endoteliales y la regulación por el microambiente. En modelos celulares humanos, la modulación de la expresión de Sox-18 se utiliza comúnmente para explorar decisiones de linaje, función de barrera y redes de regulación génica vasculares.

Sox-18 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SOX18 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sox-18 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SOX18 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SOX18, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sox-18. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SOX18 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sox-18 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sox-18 en células tumorales con expresión de SOX18 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.