Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
SNX5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427326
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SNX5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SNX5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SNX5 Anticuerpo (F-11): sc-515215
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SNX5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-427326 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Snx5 codifica la sorting nexin 5 (SNX5), una proteína adaptadora que contiene un dominio PX, se une a membranas endosómicas enriquecidas en fosfoinosítidos y participa en la clasificación endosomal y en la tubulación de membranas. SNX5 actúa en las vías de tráfico y reciclaje de receptores, incluidos procesos coordinados con complejos asociados a retromer y a SNX-BAR que dan forma a los transportadores endosómicos y regulan la recuperación de carga desde los endosomas tempranos. Al controlar el recambio de receptores y la duración de la señalización, SNX5 influye en el transporte vesicular, la polarización celular y la homeostasis de membranas. Las redes de tráfico endocítico desreguladas que involucran sorting nexins se han relacionado con neurodegeneración, reprogramación de la señalización asociada al cáncer y disfunción inmunitaria, lo que convierte a Snx5 en un nodo útil para investigaciones centradas en vías en modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SNX5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Snx5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Snx5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Snx5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SNX5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Snx5 para la investigación de la señalización de SNX5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Snx5 críticos para la función de SNX5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Snx5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SNX5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SNX5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Snx5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SNX5 (m) y el plásmido HDR SNX5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Snx5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Snx5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.