Plasmide CRISPR/Cas9 KO SNX3 (h): sc-404028

Présentation

Le gène humain **SNX3** code la sorting nexin 3, une protéine endosomale contenant un domaine PX qui se lie au phosphatidylinositol-3-phosphate et contribue à l’organisation du trafic membranaire au niveau des endosomes précoces. SNX3 agit comme un cofacteur clé de la voie du rétromère, en soutenant le recyclage, des endosomes vers l’appareil de Golgi et des endosomes vers la membrane plasmique, de cargaisons transmembranaires spécifiques, et en contribuant au tri des récepteurs, à l’homéostasie des transporteurs de nutriments et à l’atténuation des signaux. Par son rôle dans le tri endosomal et la récupération des cargaisons, SNX3 influence des processus liés à la signalisation Wnt, au renouvellement des récepteurs membranaires et à la polarité cellulaire. Des anomalies du trafic endosomal et un mauvais tri des cargaisons associé au rétromère sont impliqués dans des phénotypes de neurodégénérescence et de cancer, ce qui fait de SNX3 un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la biologie des maladies dépendante du trafic.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SNX3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SNX3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SNX3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SNX3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SNX3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SNX3 pour l'étude de la signalisation de SNX3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SNX3 essentiels à la fonction de SNX3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SNX3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SNX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SNX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SNX3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SNX3 plasmide HDR (h) et le SNX3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SNX3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SNX3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.