Plásmido CRISPR de Activación (h) SNX19: sc-406007-ACT

SNX19 humano (sorting nexin 19) codifica una sorting nexin que contiene un dominio PX, implicada en la asociación a membranas dependiente de fosfoinosítidos y en el tráfico endosomal. Como parte de la red más amplia de sorting nexins, SNX19 se asocia con procesos de transporte del endosoma al Golgi y del endosoma a la membrana plasmática que influyen en el reciclaje de receptores, el recambio de proteínas de membrana y la organización espacial de la señalización. A través de estas funciones en el transporte vesicular y la dinámica de membranas, una actividad alterada de SNX19 puede afectar vías de homeostasis celular que con frecuencia se ven perturbadas en contextos de enfermedades complejas, incluidas la señalización desregulada y fenotipos metabólicos. Por lo tanto, SNX19 es de interés para estudios mecanísticos que conecten el tráfico intracelular con la modulación de vías y cambios en el estado celular.

SNX19 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SNX19 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SNX19 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SNX19 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SNX19, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SNX19. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SNX19 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SNX19 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SNX19 en células tumorales con expresión de SNX19 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.