Plasmide CRISPR d'Activation (h) SNRK: sc-407320-ACT

La sucrose non-fermenting related kinase (SNRK) est une kinase sérine/thréonine de la famille des kinases apparentées à l’AMPK, qui intègre l’état énergétique cellulaire aux programmes métaboliques et d’adaptation au stress. SNRK a été associée à la régulation de la fonction mitochondriale, du métabolisme des lipides et du glucose, ainsi que de la signalisation inflammatoire, avec des rôles rapportés dans la biologie endothéliale et cardiaque, ainsi que dans l’homéostasie du tissu adipeux. Grâce à un contrôle des effecteurs en aval dépendant de la phosphorylation, SNRK s’articule avec des voies régissant la détection des nutriments, les réponses au stress oxydatif et le remodelage cellulaire. Des altérations de l’activité ou de l’expression de SNRK ont été associées à des phénotypes cardiométaboliques et à des mécanismes pathogéniques liés à l’inflammation, ce qui en fait une cible utile pour disséquer les réseaux de signalisation régulés par l’énergie dans les cellules humaines.

SNRK Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SNRK sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SNRK Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SNRK dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SNRK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SNRK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SNRK natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SNRK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SNRK dans les cellules tumorales présentant une expression de SNRK silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.