SMPDL3B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430315

Descripción general

Smpdl3b codifica la fosfodiesterasa de esfingomielina ácida tipo 3B (SMPDL3B), una fosfodiesterasa asociada a membrana implicada en la regulación del metabolismo de esfingolípidos y fosfolípidos en la superficie celular. SMPDL3B se ha relacionado con la modulación de la señalización de los receptores tipo Toll, los estados de activación de los macrófagos y el control homeostático de las respuestas inflamatorias mediante efectos sobre la composición lipídica de la membrana y la organización de los receptores. En la biología inmunitaria y renal del ratón, la actividad alterada de SMPDL3B se ha asociado con cambios en la capacidad de respuesta inmunitaria innata y en la función de los podocitos, conectando la remodelación lipídica con la lesión tisular y la inflamación. Como resultado, Smpdl3b se estudia con frecuencia en vías que intersectan la señalización lipídica, el tráfico endolisosomal y los fenotipos de células inmunitarias relevantes para modelos de enfermedad inflamatoria y metabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SMPDL3B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Smpdl3b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Smpdl3b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Smpdl3b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SMPDL3B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Smpdl3b para la investigación de la señalización de SMPDL3B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Smpdl3b críticos para la función de SMPDL3B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Smpdl3b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SMPDL3B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SMPDL3B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Smpdl3b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SMPDL3B (m) y el plásmido HDR SMPDL3B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Smpdl3b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Smpdl3b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.