Plasmide Double Nickase (h) SMEK1: sc-412572-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SMEK1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SMEK1 Double Nickase (h) et le plasmide SMEK1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PPP4R3A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SMEK1 | sc-412572-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SMEK1 | sc-412572-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP4R3A code SMEK1, une sous-unité régulatrice de la protéine phosphatase 4 qui contribue à orienter l’activité catalytique de PP4 vers des substrats et des compartiments subcellulaires spécifiques. SMEK1 participe au contrôle, dépendant de la phosphorylation, de la progression du cycle cellulaire, des réponses aux dommages de l’ADN et de la signalisation adaptative au stress, en modulant des événements de déphosphorylation qui façonnent la chromatine et les sorties des points de contrôle. Par ces fonctions, PPP4R3A est impliqué dans des mécanismes qui influencent la stabilité du génome et les programmes de prolifération, fréquemment perturbés en biologie du cancer. Une régulation altérée de la phosphatase liée à SMEK1 a également été étudiée dans des contextes de différenciation et d’homéostasie tissulaire, où la fidélité de la signalisation affecte des phénotypes cellulaires associés aux maladies.
SMEK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PPP4R3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PPP4R3A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PPP4R3A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PPP4R3A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.