SMCR7 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406975

Descripción general

MIEF2 codifica la proteína factor de elongación mitocondrial 2 (SMCR7/MiD51), un adaptador de la membrana externa mitocondrial que regula la fisión mitocondrial al reclutar y organizar la GTPasa DRP1. Al controlar la arquitectura de la red mitocondrial, MIEF2 influye en la eficiencia de la fosforilación oxidativa, el equilibrio de especies reactivas de oxígeno y las vías de control de calidad mitocondrial, como la mitofagia, lo que repercute en el metabolismo celular y las respuestas al estrés. La actividad alterada de MIEF2 se ha asociado con una dinámica mitocondrial desregulada observada en la neurodegeneración, la disfunción cardiometabólica y la reprogramación metabólica relacionada con el cáncer. Como nodo que vincula la morfología del orgánulo con la señalización bioenergética, MIEF2 se investiga con frecuencia en estudios sobre la susceptibilidad a la apoptosis, la señalización inmunitaria innata desde las mitocondrias y la adaptación a la hipoxia o al estrés por falta de nutrientes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SMCR7 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MIEF2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MIEF2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MIEF2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SMCR7.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MIEF2 para la investigación de la señalización de SMCR7, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MIEF2 críticos para la función de SMCR7
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MIEF2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SMCR7 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SMCR7 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MIEF2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SMCR7 (h) y el plásmido HDR SMCR7 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MIEF2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MIEF2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.