Plásmido CRISPR de Activación (h) SMCHD1: sc-404142-ACT

SMCHD1 (maintenance estructural de cromosomas, que contiene el dominio bisagra flexible 1) es un regulador epigenético que favorece interacciones de cromatina a larga distancia y una represión transcripcional estable en todo el genoma. En células humanas, SMCHD1 contribuye a la arquitectura de la cromatina de orden superior, al mantenimiento de la metilación del ADN en loci seleccionados y al silenciamiento de elementos repetitivos, intersectando con la inactivación del cromosoma X y con programas más amplios de compactación de la cromatina. Su actividad influye en redes de expresión génica que gobiernan la diferenciación y la estabilidad del genoma mediante remodelación de la cromatina y procesos asociados a la heterocromatina. La alteración de la función de SMCHD1 se vincula con un control epigenético desregulado en trastornos como la distrofia muscular facioescapulohumeral tipo 2 y el síndrome de arhinia y microftalmia de Bosma, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la regulación génica mediada por la cromatina.

SMCHD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SMCHD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SMCHD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SMCHD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SMCHD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SMCHD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SMCHD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SMCHD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SMCHD1 en células tumorales con expresión de SMCHD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.