SMARCA4/Brg1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400168-LAC

SMARCA4 (BRG1) kodiert die katalytische ATPase-Untereinheit des SWI/SNF-(BAF)-Chromatin-Remodeling-Komplexes, der Nukleosomen repositioniert, um die Zugänglichkeit der DNA und transkriptionelle Programme zu regulieren. Durch ATP-abhängiges Chromatin-Remodeling beeinflusst SMARCA4 die Linienfestlegung, die Zellzykluskontrolle, DNA-Schadensantworten und die Enhancer-Aktivität und verknüpft dabei Signalreize mit dem epigenetischen Zustand. SMARCA4 wirkt in zahlreichen Signalwegen, die Chromatinorganisation und Transkriptionsregulation steuern, einschließlich Interaktionen mit Tumorsuppressoren und Entwicklungsregulatoren. Genetische Veränderungen oder eine fehlregulierte Expression von SMARCA4 werden mit mehreren krebsassoziierten Defekten des Chromatin-Remodelings in Verbindung gebracht und machen SMARCA4 zu einem zentralen Ansatzpunkt für die Untersuchung epigenetischer Mechanismen der Krankheitsbiologie.

SMARCA4/Brg1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SMARCA4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SMARCA4/Brg1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SMARCA4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SMARCA4/Brg1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SMARCA4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.