Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLX4IP: sc-407109-ACT

La protéine humaine SLX4IP (SLX4 interacting protein) est un facteur nucléaire impliqué dans le maintien de l’intégrité du génome via des interactions avec des réseaux d’endonucléases spécifiques de structure et des échafaudages de réparation de l’ADN. Elle a été associée à des voies qui régissent les réponses aux dommages de l’ADN liés à la réplication, l’homéostasie des télomères et la résolution de structures complexes de l’ADN pouvant apparaître lors d’un stress réplicatif. Une expression altérée de SLX4IP a été reliée à des mécanismes de régulation de la longueur des télomères qui influencent la capacité proliférative des cellules et les phénotypes de stabilité du génome. Ces fonctions font de SLX4IP une cible utile pour étudier l’organisation des voies de réparation de l’ADN, la stabilité chromosomique et les programmes d’adaptation au stress pertinents pour le cancer et d’autres affections associées à l’instabilité génomique.

SLX4IP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLX4IP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLX4IP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLX4IP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLX4IP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLX4IP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLX4IP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLX4IP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLX4IP dans les cellules tumorales présentant une expression de SLX4IP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.