Plásmido CRISPR de Activación (h) Slit3: sc-402553-ACT

El gen humano **SLIT3** codifica **Slit3**, una señal guía secretada que transmite señales principalmente a través de receptores **ROBO** para regular la migración celular direccional, la guía axonal y el patrón tisular. La señalización **Slit3–ROBO** se intersecta con la remodelación del citoesqueleto y con procesos dependientes de pequeñas GTPasas que moldean la motilidad y el posicionamiento celular durante el desarrollo y la homeostasis tisular. En contextos no neuronales, **SLIT3** se ha vinculado con la biología vascular y esquelética, influyendo en respuestas angiogénicas y en la remodelación osteogénica mediante comunicación paracrina. La expresión o señalización desregulada de **SLIT3** se ha asociado con fenotipos alterados de invasión/migración y con la remodelación del microambiente tumoral, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de vías relacionadas con la metástasis y con interacciones estroma–epitelio.

Slit3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLIT3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Slit3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLIT3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLIT3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Slit3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLIT3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Slit3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Slit3 en células tumorales con expresión de SLIT3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.