Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLIRP (h): sc-418350

Présentation

SLIRP (SRA stem-loop interacting RNA binding protein) est un petit facteur mitochondrial de liaison à l’ARN qui s’associe à LRPPRC afin de stabiliser et de coordonner la prise en charge post‑transcriptionnelle des ARNm codés par le génome mitochondrial. En soutenant l’homéostasie des transcrits mitochondriaux, SLIRP contribue à la capacité de phosphorylation oxydative (OXPHOS) et au bon fonctionnement de la chaîne respiratoire, influençant le métabolisme énergétique cellulaire et les réponses au stress mitochondrial. Une perturbation de SLIRP peut dérégler les programmes d’expression génique mitochondriale et a été associée à des phénotypes de dysfonctionnement mitochondrial pertinents pour les mécanismes de maladies neuromusculaires et métaboliques. SLIRP est donc étudié dans des voies reliant la régulation de l’ARN mitochondrial, la protéostasie et l’adaptation bioénergétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLIRP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLIRP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLIRP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLIRP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLIRP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLIRP pour l'étude de la signalisation de SLIRP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLIRP essentiels à la fonction de SLIRP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLIRP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLIRP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SLIRP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLIRP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLIRP plasmide HDR (h) et le SLIRP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLIRP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLIRP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.