Plasmide CRISPR/Cas9 KO Slfn3 (m): sc-423018

Présentation

Slfn3 (schlafen 3) code un membre de la famille Schlafen, impliquée dans la régulation de la différenciation et de la prolifération cellulaires, ainsi que des programmes associés à l’immunité dans les tissus murins. Les protéines Schlafen sont couramment liées à la signalisation dépendante de la réponse aux interférons, à la modulation de la traduction et du métabolisme des ARN, et à un contrôle du cycle cellulaire dépendant du contexte. Dans des modèles épithéliaux, Slfn3 a été étudié comme un facteur associé à l’état de différenciation et à l’expression de gènes liés à la fonction barrière, ce qui le relie à des voies influençant l’homéostasie tissulaire et les réponses inflammatoires. Des altérations de l’activité de la famille Schlafen ont été explorées dans des contextes de dérégulation immunitaire et de biologie tumorale, faisant de Slfn3 une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle de la croissance et des réseaux de signalisation immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Slfn3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slfn3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slfn3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slfn3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Slfn3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slfn3 pour l'étude de la signalisation de Slfn3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Slfn3 essentiels à la fonction de Slfn3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slfn3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Slfn3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Slfn3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slfn3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Slfn3 plasmide HDR (m) et le Slfn3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slfn3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slfn3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.