Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC6A14 (h): sc-408198

Présentation

SLC6A14 (également connu sous le nom d’ATB0,+) code un transporteur de la membrane plasmique dépendant du sodium et du chlorure, qui assure l’absorption concentrative d’acides aminés neutres et cationiques, avec une capacité notable à transporter un large spectre de substrats, notamment des acides aminés essentiels. En régulant la disponibilité intracellulaire en acides aminés, SLC6A14 influence les voies de signalisation de détection des nutriments et du métabolisme telles que mTORC1, modulant la croissance cellulaire, l’équilibre rédox et l’adaptation au stress. Son expression a été associée à la physiologie du transport épithélial et à des flux d’acides aminés altérés dans des contextes pathologiques où l’acquisition des nutriments et le métabolisme sont reprogrammés. En tant que transporteur de solutés à la surface cellulaire, SLC6A14 constitue un point d’entrée exploitable pour analyser la contribution du transport des acides aminés à la prolifération, à la différenciation et aux interactions immuno‑métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC6A14 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC6A14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC6A14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC6A14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLC6A14.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC6A14 pour l'étude de la signalisation de SLC6A14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC6A14 essentiels à la fonction de SLC6A14
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC6A14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLC6A14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SLC6A14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC6A14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLC6A14 plasmide HDR (h) et le SLC6A14 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC6A14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC6A14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.