SLC35D1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407065

Descripción general

SLC35D1 codifica un transportador de azúcares nucleotídicos residente en el aparato de Golgi que media la importación de ácido UDP‑glucurónico y UDP‑N‑acetilgalactosamina al lumen para sustentar la biosíntesis de glicosaminoglicanos. Al controlar la disponibilidad de sustratos para las glicosiltransferasas, SLC35D1 influye en el ensamblaje de proteoglicanos, la organización de la matriz extracelular y el desarrollo del cartílago. La alteración de SLC35D1 se ha vinculado a fenotipos de displasia esquelética compatibles con una producción deficiente de sulfato de condroitina y una composición de proteoglicanos modificada. Como resultado, SLC35D1 se estudia con frecuencia en vías relacionadas con la glicosilación en el Golgi, la biología de la matriz y la diferenciación de condrocitos y de otros linajes de tejido conectivo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SLC35D1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC35D1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC35D1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC35D1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SLC35D1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC35D1 para la investigación de la señalización de SLC35D1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC35D1 críticos para la función de SLC35D1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC35D1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SLC35D1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SLC35D1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC35D1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SLC35D1 (h) y el plásmido HDR SLC35D1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC35D1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC35D1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.