SLC35D1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407065

Panoramica

SLC35D1 codifica un trasportatore di zuccheri nucleotidici residente nel Golgi che media l’importazione di UDP-acido glucuronico e UDP-N-acetilgalattosammina nel lume, a supporto della biosintesi dei glicosaminoglicani. Controllando la disponibilità di substrati per le glicosiltransferasi, SLC35D1 influenza l’assemblaggio dei proteoglicani, l’organizzazione della matrice extracellulare e lo sviluppo della cartilagine. L’alterazione di SLC35D1 è associata a fenotipi di displasia scheletrica coerenti con una produzione compromessa di solfato di condroitina e con una composizione dei proteoglicani modificata. Di conseguenza, SLC35D1 è spesso studiato in vie correlate alla glicosilazione nel Golgi, alla biologia della matrice e alla differenziazione dei condrociti e di altre linee del tessuto connettivo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC35D1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC35D1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC35D1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC35D1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SLC35D1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC35D1 per lo studio della segnalazione di SLC35D1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC35D1 critici per la funzione di SLC35D1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC35D1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SLC35D1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SLC35D1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC35D1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SLC35D1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SLC35D1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC35D1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC35D1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.