Particules Lentivirales d'Activation (h) SLC35B4: sc-413728-LAC

SLC35B4 code un transporteur de sucres nucléotidiques associé à l’appareil de Golgi et au réticulum endoplasmique (RE), qui assure l’import de l’UDP-xylose et de l’UDP‑N‑acétylglucosamine dans la lumière de la voie sécrétoire, soutenant la glycosylation et la biosynthèse des protéoglycanes. En contrôlant la disponibilité de sucres activés pour les glycosyltransférases, SLC35B4 influence la maturation des glycannes, l’organisation de la matrice extracellulaire et la signalisation des récepteurs dépendante des glycannes. Des altérations du transport des sucres nucléotidiques et des programmes de glycosylation en aval sont impliquées dans la dérégulation métabolique ainsi que dans des modifications liées au cancer de l’adhésion cellulaire, de la migration et de la reconnaissance immunitaire. Ainsi, SLC35B4 est étudié dans des voies reliant l’homéostasie du Golgi et le métabolisme des glucides au remodelage du glycome de surface cellulaire et à des phénotypes pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales SLC35B4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SLC35B4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SLC35B4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SLC35B4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SLC35B4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SLC35B4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.