Plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC13A5 (h): sc-407118

Présentation

SLC13A5 code un transporteur de citrate dépendant du sodium (NaCT) qui assure l’absorption cellulaire du citrate, reliant la disponibilité du citrate extracellulaire aux flux de carbone intracellulaires. En influençant les réserves de citrate cytosolique, SLC13A5 favorise la production d’acétyl-CoA nécessaire à la lipogenèse de novo et à l’acétylation des protéines, et peut moduler des réseaux de détection énergétique qui coordonnent la glycolyse, l’anaplérose du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs) et l’équilibre rédox. L’activité de SLC13A5 est surtout étudiée dans les tissus à forte activité métabolique et dans les neurones, où le transport du citrate se situe à l’interface du métabolisme mitochondrial et de la régulation épigénétique via des voies dépendantes de l’acétylation. Des perturbations génétiques de SLC13A5 ont été associées à des dysfonctionnements neurométaboliques ainsi qu’à des altérations de l’homéostasie des lipides et du glucose, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des phénotypes métaboliques et neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC13A5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC13A5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC13A5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC13A5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SLC13A5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC13A5 pour l'étude de la signalisation de SLC13A5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC13A5 essentiels à la fonction de SLC13A5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC13A5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SLC13A5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SLC13A5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC13A5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SLC13A5 plasmide HDR (h) et le SLC13A5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC13A5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC13A5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.