Plasmide CRISPR d'Activation (m) SLC12A8: sc-431364-ACT

Slc12a8 code pour SLC12A8, un membre de la famille des transporteurs SLC12 (solute carrier 12), des transporteurs couplés aux cations qui régulent les gradients ioniques membranaires et contribuent à l’homéostasie osmotique des épithéliums et des cellules. En modulant les flux couplés de Na⁺/K⁺/Cl⁻ et les forces motrices électrochimiques associées, SLC12A8 peut influencer le contrôle du volume cellulaire, les processus de transport transépithélial et les signaux en aval liés aux voies métaboliques et de réponse au stress. Une activité altérée des transporteurs SLC12 est souvent associée à des perturbations de l’équilibre électrolytique et de la physiologie tissulaire, faisant de Slc12a8 une cible utile pour étudier les mécanismes dépendants des transporteurs dans des contextes physiologiques et pathologiques. Dans des modèles murins, la régulation de Slc12a8 peut être exploitée pour étudier comment le transport ionique s’articule avec la fonction barrière, l’inflammation et l’adaptation métabolique.

SLC12A8 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Slc12a8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLC12A8 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Slc12a8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Slc12a8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLC12A8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Slc12a8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLC12A8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLC12A8 dans les cellules tumorales présentant une expression de Slc12a8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.