Plasmide CRISPR d'Activation (h) Skp2 p45: sc-400534-ACT

SKP2 code pour la protéine à boîte F Skp2 p45, un composant de reconnaissance des substrats du complexe E3 ubiquitine-ligase SCF (SKP1–CUL1–F-box) qui contrôle le renouvellement protéasomal de régulateurs clés du cycle cellulaire. En favorisant l’ubiquitination de cibles telles que CDKN1B/p27^Kip1 et d’autres protéines inhibitrices de la croissance, Skp2 soutient la transition G1/S, la compétence pour la réplication de l’ADN et des réponses de points de contrôle coordonnées. L’activité de SKP2 s’articule avec des programmes de signalisation liés à PI3K–AKT, RB–E2F et TGF-β, qui façonnent la prolifération, la sénescence et l’adaptation au stress. Une expression ou une fonction dérégulée de SKP2 a été associée à une altération du contrôle du cycle cellulaire et à une instabilité génomique dans de multiples contextes pertinents pour la maladie, ce qui en fait un nœud fréquent des études mécanistiques sur la signalisation oncogénique et l’homéostasie des protéines.

Skp2 p45 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SKP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Skp2 p45 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SKP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SKP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Skp2 p45. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SKP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Skp2 p45 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Skp2 p45 dans les cellules tumorales présentant une expression de SKP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.