Skint8 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-437039-LAC-2

Mouse Skint8 (selection and upkeep of intraepithelial T cells protein 8) ist ein Mitglied der Butyrophilin-like-/Skint-Familie, die an der epithelialen Immunregulation beteiligt ist, und hat mutmaßliche Funktionen bei der Prägung der Selektion und Aufrechterhaltung von T-Zellen in Barrieregeweben wie der Haut. Skint-Proteine werden allgemein mit Zell-Zell-Interaktionen und antigenrezeptorabhängigen Signalprogrammen in Verbindung gebracht, die die Differenzierung von Lymphozyten im Thymus und in der Peripherie beeinflussen und so zur immunologischen Homöostase gewebsresidierender Zellen beitragen. Eine Fehlregulation von Signalwegen der Skint-Familie ist relevant für Untersuchungen zur kutanen Entzündung, zur Wirtsabwehr an epithelialen Oberflächen und zu Mechanismen der Immunüberwachung. Skint8 ist daher ein nützliches Ziel für Gen-Editing, um den epithelial-immunologischen Crosstalk zu untersuchen, Entwicklungsreize gewebsresidierender T-Zellen zu kartieren und zu modellieren, wie barriereassoziierte immunregulatorische Netzwerke entzündliche Phänotypen in Mausmodellen beeinflussen.

Skint8 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Skint8-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Skint8 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Skint8-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Skint8-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Skint8-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.