Six5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410513

Descripción general

SIX5 codifica el factor de transcripción homeobox humano Six5, un regulador de unión al ADN que ayuda a coordinar programas de expresión génica durante el desarrollo y la diferenciación tisular. Six5 se asocia con el control de redes transcripcionales que gobiernan decisiones sobre el destino celular y puede interactuar con vías relacionadas con la progresión del ciclo celular y la regulación de genes sensibles al estrés. Alteraciones en la dosis de SIX5 o una expresión desregulada se han implicado en fenotipos relevantes para enfermedades, incluidas características asociadas a la distrofia miotónica tipo 1, a través de efectos sobre loci vecinos y paisajes regulatorios compartidos. Dado que Six5 influye en la transcripción específica de linaje y en la homeostasis celular, se estudia con frecuencia en modelos de biología del desarrollo, función neuromuscular y desregulación transcripcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Six5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SIX5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SIX5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SIX5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Six5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SIX5 para la investigación de la señalización de Six5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SIX5 críticos para la función de Six5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SIX5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Six5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Six5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SIX5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Six5 (h) y el plásmido HDR Six5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SIX5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SIX5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.