Six2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402975

Descripción general

SIX2 codifica Six2, un factor de transcripción homeobox que regula la identidad de las células progenitoras y la organogénesis al controlar el compromiso de linaje y los programas de señalización epitelio‑mesenquimales. En el desarrollo humano, Six2 es conocido sobre todo por mantener a los progenitores de la nefrona y por modular redes transcripcionales junto con otros reguladores del desarrollo renal, lo que influye en el momento de la diferenciación y en el patrón del tejido. La expresión desregulada de SIX2 o la actividad alterada de Six2 se ha implicado en anomalías congénitas y en la reprogramación transcripcional asociada a tumores, donde se cooptan vías del desarrollo para favorecer un crecimiento alterado y una mayor invasividad. Como proteína nuclear que se une al ADN, Six2 ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar los circuitos de regulación génica, la dinámica de los estados de la cromatina y la interacción (crosstalk) entre vías de señalización del desarrollo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Six2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SIX2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SIX2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SIX2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Six2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SIX2 para la investigación de la señalización de Six2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SIX2 críticos para la función de Six2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SIX2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Six2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Six2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SIX2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Six2 (h) y el plásmido HDR Six2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SIX2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SIX2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.