SIRT6 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424467-ACT

Il gene murino **Sirt6** codifica **SIRT6**, una deacilasi nucleare dipendente da **NAD+** che regola la struttura della cromatina e la trascrizione attraverso attività di deacetilazione dell’istone H3 e di ADP-ribosilazione. SIRT6 integra il sensing metabolico con la manutenzione del genoma modulando la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA, la stabilità dei telomeri e le risposte allo stress replicativo, e influenza il metabolismo di glucosio e lipidi tramite il controllo di programmi genici glicolitici e infiammatori. Dal punto di vista funzionale, SIRT6 interseca vie che coinvolgono la segnalazione di NF-κB, le risposte allo stress ossidativo e il rimodellamento della cromatina, plasmando l’invecchiamento cellulare e la resilienza allo stress. Un’attività di SIRT6 deregolata è stata collegata in ambito di ricerca a fenotipi associati all’età, squilibri metabolici e stati infiammatori, rendendola un nodo chiave per studi meccanicistici in sistemi murini.

SIRT6 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Sirt6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SIRT6 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Sirt6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Sirt6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SIRT6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Sirt6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SIRT6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SIRT6 nelle cellule tumorali con espressione di Sirt6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.