Plasmide CRISPR d'Activation (m) SIRT6: sc-424467-ACT

Le gène murin *Sirt6* code SIRT6, une désacylase nucléaire dépendante du NAD+ qui régule la structure de la chromatine et la transcription via des activités de désacétylation de l’histone H3 et d’ADP‑ribosylation. SIRT6 fait le lien entre la détection de l’état métabolique et le maintien du génome en modulant la réparation des cassures double brin de l’ADN, la stabilité des télomères et les réponses au stress de réplication, et elle influence le métabolisme du glucose et des lipides via le contrôle de programmes géniques glycolytiques et inflammatoires. Sur le plan fonctionnel, SIRT6 s’articule avec des voies impliquant la signalisation NF‑κB, les réponses au stress oxydatif et le remodelage de la chromatine, façonnant le vieillissement cellulaire et la résistance au stress. Une activité dérégulée de SIRT6 a été associée dans la recherche à des phénotypes liés à l’âge, à des déséquilibres métaboliques et à des états inflammatoires, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques dans les modèles murins.

SIRT6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sirt6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SIRT6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sirt6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sirt6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SIRT6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sirt6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SIRT6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SIRT6 dans les cellules tumorales présentant une expression de Sirt6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.