Plasmide Double Nickase (h) SIRT4: sc-401187-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SIRT4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SIRT4 Double Nickase (h) et le plasmide SIRT4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SIRT4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SIRT4 Antibody (95.1): sc-135797
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SIRT4 | sc-401187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SIRT4 | sc-401187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SIRT4 code une sirtuine mitochondriale qui utilise le NAD+ pour réguler des modifications post-traductionnelles, reliant l’état rédox cellulaire au contrôle du métabolisme. SIRT4 module le choix des substrats énergétiques mitochondriaux en inhibant la glutamate déshydrogénase et en régulant l’anaplérose des acides aminés, avec des effets en aval sur le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs), la phosphorylation oxydative et l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène. Elle influence également le métabolisme lipidique, les voies de sécrétion d’insuline et les réponses au stress cellulaire via une signalisation mitochondriale coordonnée. Une activité dérégulée de SIRT4 a été associée à des phénotypes métaboliques altérés et a été étudiée dans des contextes incluant le métabolisme tumoral, la neurodégénérescence et des modèles de maladies cardiométaboliques.
SIRT4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SIRT4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SIRT4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SIRT4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SIRT4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.