Plasmide Double Nickase (m) SIRT2: sc-425703-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) SIRT2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SIRT2 Double Nickase (m) et le plasmide SIRT2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Sirt2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SIRT2 Antibody (A-5): sc-28298
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) SIRT2 | sc-425703-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Sirt2** code la désacétylase **SIRT2** dépendante du **NAD⁺**, une sirtuine principalement cytosolique qui navette également vers le noyau et régule l’acétylation de substrats clés, notamment l’**α-tubuline** et les histones. En contrôlant la dynamique des microtubules, la progression du cycle cellulaire, l’organisation de la chromatine et la signalisation métabolique en réponse au stress, SIRT2 influence des processus tels que la fidélité mitotique, la signalisation inflammatoire et l’homéostasie neuronale. L’activité de SIRT2 s’inscrit à l’interface de voies liées à la détection de l’énergie et à la protéostasie, notamment via un dialogue avec des programmes associés à **FOXO** et **NF-κB**, ainsi que par la régulation des états d’acétylation des protéines qui affectent l’autophagie et les réponses au stress oxydatif. Des altérations de l’expression ou de la fonction de SIRT2 ont été étudiées dans le contexte de la neurodégénérescence, du dysfonctionnement métabolique et de phénotypes liés au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques dans des modèles murins et des cellules primaires.
SIRT2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Sirt2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Sirt2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Sirt2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Sirt2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.