Plasmide CRISPR d'Activation (m) SIRT1: sc-430046-ACT

Le gène murin **Sirt1** code **SIRT1**, une désacétylase protéique dépendante du NAD⁺ qui couple l’état énergétique cellulaire à la régulation transcriptionnelle et de la chromatine. SIRT1 module les réponses au stress, la biogenèse mitochondriale et le métabolisme en désacétylant des régulateurs clés tels que PGC-1α, les facteurs FOXO, NF-κB et p53, influençant ainsi le contrôle du stress oxydant, l’inflammation et les programmes de survie cellulaire. Par ces activités, SIRT1 intègre les voies de détection des nutriments et les mécanismes de contrôle épigénétique qui façonnent la différenciation et la physiologie de l’organisme. Une signalisation SIRT1 dérégulée a été impliquée dans divers modèles de dysfonctionnement métabolique, de neurodégénérescence, d’inflammation et de phénotypes liés au cancer, ce qui en fait un nœud largement utilisé pour des études mécanistiques de la régulation génique.

SIRT1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sirt1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SIRT1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sirt1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sirt1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SIRT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sirt1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SIRT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SIRT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Sirt1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.