Shh Lentiviral Activation Particles (h): sc-400225-LAC

Das humane SHH-Gen kodiert Sonic hedgehog (Shh), einen sezernierten Morphogen, der embryonale Gewebe strukturiert und über die Hedgehog-Signalkaskade Zellschicksalsentscheidungen reguliert. Die Bindung von Shh an PTCH1 hebt die Hemmung von SMO auf, ermöglicht die Aktivierung der GLI-Transkriptionsfaktoren und nachgeschaltete Programme, die Proliferation, Differenzierung und Gewebeorganisation steuern. In der adulten Biologie trägt SHH zur Aufrechterhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen sowie zur epithelial-mesenchymalen Signalübertragung in mehreren Organen bei. Eine fehlregulierte Aktivität des SHH-Signalwegs wurde mit Entwicklungsfehlbildungen und onkogenen Signalkontexten in Verbindung gebracht, wodurch SHH zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien von Morphogengradienten und Signalweg-Crosstalk wird.

Shh Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SHH-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Shh Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SHH-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Shh-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SHH-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.