Shank2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431686

Übersicht

Shank2 kodiert das Protein „SH3 and multiple ankyrin repeat domains protein 2“ (SHANK2), ein Gerüstprotein der postsynaptischen Dichte, das glutamaterge Synapsen organisiert, indem es ionotrope Rezeptoren und Adhäsionskomplexe mit nachgeschalteter Signalübertragung und dem Aktin-Zytoskelett verbindet. In Neuronen trägt SHANK2 über Interaktionen mit Proteinen der PSD-95-Familie, Homer–mGluR-Komplexen und aktinregulierenden Signalwegen zur Koordination der synaptischen Reifung, der Morphogenese dendritischer Spines und des aktivitätsabhängigen Umbaus bei. Eine Störung der Shank2-abhängigen Gerüstbildung kann die exzitatorische synaptische Transmission und die Synapsenhomöostase verändern, wodurch SHANK2 häufig als zentraler Knotenpunkt in Programmen der neuronalen Konnektivität und Plastizität untersucht wird. Genetische und funktionelle Studien haben Veränderungen von SHANK2 mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die Modellierung von Mechanismen synaptischer Dysfunktion in vivo und in kultivierten Mausneuronen untermauert.

Das Shank2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Shank2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Shank2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Shank2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Shank2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Shank2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Shank2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Shank2-Exone abzielen, die für die Shank2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Shank2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Shank2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Shank2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Shank2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Shank2 HDR-Plasmid (m) und Shank2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Shank2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Shank2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.