Plasmide CRISPR d'Activation (h) SH2D1A: sc-404747-ACT

SH2D1A code la protéine adaptatrice associée à SLAM (SAP), un adaptateur de signalisation contenant un domaine SH2 qui couple les récepteurs de la famille SLAM aux voies de tyrosine kinases en aval dans les lymphocytes. En médiant des événements de signalisation proximaux au récepteur, SAP régule l’activation des lymphocytes cytotoxiques, les interactions entre cellules T et cellules B, ainsi que la dynamique des centres germinatifs qui façonne les réponses immunitaires adaptatives. L’activité de SH2D1A influence la formation de la synapse immunologique et les fonctions effectrices via la modulation des cascades de phosphorylation et de la signalisation de récepteurs de type « checkpoint ». Des variations pathogènes de SH2D1A sont associées à des phénotypes d’immunodéficience primitive, notamment la maladie lymphoproliférative liée à l’X, soulignant son importance pour l’homéostasie immunitaire et la recherche sur l’immunité antivirale.

SH2D1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SH2D1A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SH2D1A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SH2D1A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SH2D1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SH2D1A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SH2D1A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SH2D1A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SH2D1A dans les cellules tumorales présentant une expression de SH2D1A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.