Plasmide CRISPR/Cas9 KO SGTA (m): sc-424626

Présentation

Le gène murin **Sgta** code la petite protéine alpha contenant des répétitions tétratricopeptides riche en glutamine (SGTA), un co-chaperon cytosolique qui se lie aux complexes HSP70/HSP90 et reconnaît des protéines clientes hydrophobes via ses domaines TPR. SGTA participe au contrôle qualité des protéines naissantes et mal localisées, en coordonnant les décisions d’orientation entre repliement, adressage membranaire et voies de dégradation protéasomale. Elle est impliquée dans la prise en charge des protéines à ancre C‑terminale (tail-anchored) médiée par BAG6/GET ainsi que dans la régulation du renouvellement dépendant de l’ubiquitine, reliant SGTA à la protéostasie et aux réponses cellulaires au stress. Les voies d’homéostasie protéique dérégulées impliquant SGTA sont pertinentes pour des études mécanistiques de la neurodégénérescence, de l’adaptation des cellules cancéreuses au stress et des troubles de la biogenèse des protéines membranaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SGTA (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sgta dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sgta, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sgta à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SGTA.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sgta pour l'étude de la signalisation de SGTA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sgta essentiels à la fonction de SGTA
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sgta pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SGTA plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SGTA plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sgta. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SGTA plasmide HDR (m) et le SGTA (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sgta pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sgta définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.