SEZ6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422895

Übersicht

Sez6 kodiert „seizure-related 6 homolog“ (SEZ6), ein Transmembranprotein vom Typ I, das im Nervensystem angereichert ist und zur neuronalen Differenzierung, dendritischen Verzweigung (Arborisierung) und Synapsenbildung beiträgt. SEZ6 ist an Membrantransport- und proteolytischen Prozessierungswegen beteiligt, einschließlich des Sheddings der Ektodomäne, das die Zell-Zell-Signalübertragung und Programme des Neuritenauswuchses beeinflussen kann. In Mausmodellen wurde eine veränderte Sez6-Expression oder -Funktion mit Veränderungen der synaptischen Konnektivität und der Erregungs-/Hemmungs-Balance in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für neuroentwicklungsbezogene und anfallsassoziierte Phänotypen untermauert. Als neuronaler, oberflächenassoziierter Regulator wird SEZ6 häufig im Kontext der Reifung neuronaler Schaltkreise und aktivitätsabhängiger Plastizität untersucht.

Das SEZ6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sez6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sez6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sez6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEZ6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sez6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEZ6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sez6-Exone abzielen, die für die SEZ6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sez6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SEZ6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SEZ6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sez6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEZ6 HDR-Plasmid (m) und SEZ6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sez6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sez6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.