Plásmido CRISPR de Activación (h) serum reponse factor /SRF: sc-400470-ACT

El SRF (serum response factor; factor de respuesta al suero) humano es un factor de transcripción de la familia MADS-box que se une a elementos de respuesta al suero para coordinar programas de expresión génica de respuesta inmediata frente a factores de crecimiento, mitógenos y señales mecánicas. Integra la señalización a través de la dinámica RhoA–actina mediante cofactores MRTF y de las vías MAPK/ERK mediante factores del complejo ternario, para regular la organización del citoesqueleto, la adhesión celular, la migración y la diferenciación miogénica. Las redes transcripcionales dependientes de SRF modelan la expresión génica del músculo liso y cardíaco y procesos más amplios de remodelación sensibles al estrés. La actividad desregulada de SRF se ha asociado con señalización proliferativa aberrante, motilidad alterada y remodelación tisular patológica, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de circuitos de regulación génica.

serum reponse factor /SRF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SRF sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

serum reponse factor /SRF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SRF en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SRF, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de serum reponse factor /SRF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SRF y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de serum reponse factor /SRF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía serum reponse factor /SRF en células tumorales con expresión de SRF silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.