Plásmido Doble Nickase (h) Septin 2: sc-403840-NIC

SEPT2 codifica la septina 2, una proteína citoesquelética de unión a GTP que polimeriza en filamentos de septinas hetero-oligoméricos y estructuras en forma de anillo que actúan como barreras de difusión y andamios en la corteza celular. La septina 2 coordina la citocinesis, la polaridad celular, el tráfico vesicular y la organización de microtúbulos/actina, conectando la remodelación de membranas con la progresión del ciclo celular. Interactúa con vías que gobiernan la abscisión y la dinámica del citoesqueleto, y la alteración del ensamblaje de septinas se ha asociado con aneuploidía, comportamiento celular invasivo y arquitectura epitelial alterada. También se ha informado desregulación de la expresión o la localización de SEPT2 en contextos neurodegenerativos y relacionados con el cáncer, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar el control citoesquelético de la proliferación y la organización tisular.

Septin 2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SEPT2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SEPT2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SEPT2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SEPT2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.